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1、前言

咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經興奮劑，能夠暫時的驅走睡意并恢復精力，臨床上用于治療神經衰弱和昏迷復蘇。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是普遍被使用的精神藥品。適度地使用咖啡因具有舒張血管、促進血液循環、預防高血壓、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、減肥等藥理和生理作用，但是，大劑量或長期使用也會對人體造成損害，能夠導致“咖啡因中毒”，如神經過敏，易怒，焦慮，震顫，肌肉抽搐（反射亢進），失眠和心悸。中國把咖啡因列為“精神藥品”管制，屬于一種毒品。目前有關咖啡因檢測分析的研究報道不多，為此本文通過使用SPE 1000全自動固相萃取系統對人體血液中咖啡因進行回收率測定分析，探索血液咖啡因樣本檢測的方法。

2、實驗過程2.1儀器與試劑

SPE 1000全自動固相萃取系統，萊伯泰科

MV5多通道平行濃縮系統，萊伯泰科

LC600 二元高壓梯度高效液相色譜，萊伯泰科

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號：PZ12602）

血液替代品：牛血清，市售

2.2工作液配制

咖啡因標準儲備液：100μg/mL

咖啡因標準工作液：取1mL標準儲備液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL標準工作液

2.3實驗部分

2.3.1樣品制備

取血液樣本1mL加入磷酸鹽緩沖液1mL平衡，加入50μL標準工作液，混合均勻，加標濃度為500ng/mL，待固相萃取。

2.3.2凈化與濃縮

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號：PZ12702）用5mL甲醇乙酸乙酯（1：1）、5mL水和5mL磷酸鹽緩沖液進行活化，取全部樣液上樣，上樣結束后用2mL磷酸鹽緩沖液和2mL水淋洗萃取柱，在真空狀態下干燥0.5min，最后用5mL 磷酸鹽緩沖液近干后，用流動相定容至1mL 。渦旋混勻，0.22μm濾膜過濾，待檢測。

2.3.3 高效液相色譜檢測條件

色譜柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm

波長：272nm

流速：1mL/min

柱溫：40℃

進樣量：20μL

流動相：甲醇-水= 24：76

3、實驗結果

圖1標準樣品色譜圖

圖2加標樣品色譜圖

圖3空白樣品色譜圖表1 加標回收率結果

4、結論

本次實驗展示了一種使用EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號：PZ12702）對血液中咖啡因進行萃取凈化，其加標回收率95.8%~99.2%，重復性RSD為1.6%。說明EZsep^TMHLB固相萃取柱適用于血液中咖啡因的檢測，并且在回收率和平行性上表現優異。

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耗材專區血液中咖啡因的測定

2.2工作液配制

2.3.1樣品制備

2.3.2凈化與濃縮

2.3.3 高效液相色譜檢測條件